彗星实验

彗星实验（Comet assay）又称单细胞凝胶电泳实验，是在单细胞水平检测有核细胞DNA断裂的技术。细胞受到氧化应激、辐射、化学物质等损伤因子作用时，DNA链会发生断裂，形成大小不一的片段。在碱性条件下，DNA双链解旋，断裂的DNA片段从核中释放出来，在电场作用下向阳极迁移，形成彗星形态。DNA受损越严重，迁移的DNA量越多，迁移距离越长。通过测定迁移部分的长度可定量测定单个细胞DNA损伤程度。

 

    实验过程：

1. 准备细胞；

2. 第一层凝胶德制备：在载玻片上，1%正常熔点琼脂糖凝胶的制备，加盖玻片，4℃放置大于10min使其凝固；

3. 第二层凝胶的制备：10ul细胞（104个）和75ul的0.7%低熔点琼脂糖混合均匀，滴加到第一层凝胶上，4℃放置大于10min；

4. 在4℃细胞裂解过夜；

5. 将载玻片放入水平电泳槽中，倒入4℃预冷的电泳缓冲液，室温放置60min；

6. 电泳电压设定为20V，时间20min；

7. 电泳后将载玻片置于平皿内，加入中性缓冲液，4℃中和1-3次，每次10min；

8. 在载玻片上滴加20ulPI溶液，避光染色10min ，超纯水洗涤3次，盖上盖玻片；

9. 实验结果。