文献解析—心外膜HDAC3通过一种新的MicroRNA途径促进心肌生长

189 人阅读发布时间：2022-09-09 14:48

 

1. 背景

心肌壁的建立需要来自非心肌组织的适当生长引导。在心脏发育过程中，心外膜和心外膜衍生细胞通过分泌FGF9（成纤维细胞生长因子）和IGF2（胰岛素样生长因子）来调节心肌生长。然而，人们对心外膜分泌因子的调节，尤其是对心肌形成的染色质修饰方面知之甚少。本研究旨在研究心脏发育过程中心外膜中的HDAC3（组蛋白去乙酰化酶）是否以及如何调节心肌生长。 

 

2. 材料

体内实验：实验组：Hdac3^flox/f ；Wt1Cre^ERT2/+
对照组：Hdac3f^lox/+ ；Wt1Cre^ERT2/+   
体外实验：实验组：MEC Hdac3 KO
对照组：MEC EV
MEC：永生化小鼠胚胎心外膜细胞
CMs：Tnnt2n^GFP/+38心脏中分离的原代胚胎心肌细胞
 

3. 研究内容

1. 在小鼠胚胎心脏敲除Hdac3对心壁发育的影响
2. RNA-seq揭示MEC Hdac3 KO的下调表达基因
3. HDAC3 诱导 FGF9 和 IGF2 与自身酶活性的关系
4. miRNA-seq揭示HDAC3  诱导 FGF9 和 IGF2 的途径
5. HDAC3 对 miR-322/miR-503 启动子活性的影响

 

4. 结果
   1. 小鼠胚胎心脏特异性敲除Hdac3导致心室壁发育不全

胚胎发育8.54天，腹腔注射Tamoxifen,敲除Hdac3，导致 心脏致密层厚度变薄，心肌细胞增殖被抑制。

1. 2. MEC中敲除Hdac3导致 FGF9 和 IGF下调

 MEC Hdac3 KO的RNA-seq结果发现 Fgf9和lgf2表达量显著下调，qpcr和wb验证了KO组中Fgf9和lgf2表达量下调。


KO MEC上清液中的FGF9和IGF2表达量下调，用KO MEC处理CMs,新增殖细胞和总细胞数量下降。 用FGF9和IGF2蛋白补充上清液处理，可挽救心肌细胞增殖缺陷的表型。

1. 3. HDAC3 诱导 FGF9 和 IGF2 表达依赖于其脱乙酰酶活性。

 用 RGFP966（一种选择性的 HDAC3 去乙酰化酶抑制剂）处理 MEC。RGFP966 处理显着降低了 FGF9 和 IGF2, 用慢病毒野生型 Hdac3 在 Hdac3 KO MEC 中进行基因拯救，成功的恢复了 Fgf9 和 Igf2 的表达。


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